Metodología para la obtención y evaluación de un extracto proteínico de una cepa autóctona de Helicobacter pylori / Methodology to obtain and evaluate a protein extract of an autochthonous Helicobacter pylori strain

Helicobacter pylori es una bacteria gram negativa que posee numerosos antígenos que juegan un importante papel en la patogénesis de las enfermedades gastroduodenales. Debido a la necesidad de métodos de diagnóstico estandarizados con antígenos locales u autóctonos nos propusimos el diseño de una estrategia para la obtención de extractos de antígenos con reactividad frente a sueros de pacientes infectados por H. pylori. Dos cepas de H. pylori, una autóctona (IPK196A) y una de referencia ATCC 43504, se cultivaron en un medio líquido modificado. Se sometieron a los protocolos de ruptura por ultrasonido aplicándose tres variantes de precipitación y al fraccionamiento celular mediante ultracentrifugación diferencial. Los extractos proteínicos se visualizaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida y se transfirieron para la detección de antígenos inmunorreactivos a sueros de pacientes con infección por H. pylori e individuos sanos. La variante de ultrasonido y precipitación con Coomasie fue la más efectiva para concentrar las muestras. El método de ultracentrifugación mejoró la resolución de las proteínas reactivas y permitió separarlas según su localización subcelular. El sistema de transferencia húmedo fue ideal para la inmunodetección de los antígenos obtenidos por ultrasonido mientras que el sistema semiseco permitió detectar las proteínas de membrana obtenidas por ultracentrifugación diferencial. La introducción de una metodología en el laboratorio para la obtención y evaluación de extractos proteínicos antigénicos a partir de cepas autóctonas de H. pylori, constituye la antesala para el diseño de futuros diagnosticadores y candidatos vacunales(AU)

Helicobacter pylori is a gram-negative spiral-shaped bacterium, which has many antigens that play an important role in the pathogenesis of gastroduodenal diseases. Due to the lack of standardized methods from native or autochthonous antigens, we proposed in this study, the design of a strategy for extracting and obtaining immunoreactive antigens against H. pylori infected-patient sera. Two H. pylori strains, one autochthonous (IPK196A) and one reference ATCC 43504, were cultured in a modified liquid medium. Both strains were subjected to the ultrasound rupture protocols applying three precipitation variants and cell fractionation by differential ultracentrifugation. Protein extracts were visualized by polyacrylamide gel electrophoresis and transferred for the detection of immunoreactive antigens to sera from patients with H. pylori infection and healthy individuals. The precipitation with Coomasie was the most effective variant. The ultracentrifugation extraction method optimized the resolution of the proteins, which could be separated according to their subcellular location. The wet transfer system was ideal for the immunodetection of the antigens obtained by ultrasound, while the semi-dry system allowed detecting the membrane proteins by differential ultracentrifugation. The introduction of a methodology in the laboratory for obtaining and evaluating antigenic antibodies from autochthonous strains of H. pylori, is the prelude to the design for future diagnostics and vaccine candidates(AU)

Evaluación del desempeño de dos pruebas para la detección de antígeno de Helicobacter pylori en heces / Evaluation of the accuracy of two stool antigen tests for Helicobacter pylori infection

Introducción: la detección de antígeno en heces se ha considerado una prueba prometedora para el diagnóstico de la infección por Helicobacter pylori. Para su introducción en la práctica médica, es un requisito indispensable demostrar el desempeño adecuado del método en la población de estudio. Objetivo: evaluar la capacidad diagnóstica de los sistemas comerciales ELISA SD y SD BIOLINE, del fabricante Standard Diagnostics, Corea, en pacientes cubanos con síntomas gastroduodenales. Métodos: se evaluaron 101 muestras de heces de pacientes previamente clasificados como H. pylori positivos y negativos por las pruebas de referencia de histología y prueba rápida de la ureasa. Se calcularon los parámetros de desempeño de ambos sistemas diagnósticos por el programa EPIDAT 3.1. Resultados: la sensibilidad para los sistemas ELISA SD y SD BIOLINE fue de 85,25 por ciento y 75,41 por ciento, respectivamente. La especificidad para ambos fue de 92,50 por ciento. Los valores predictivos positivos y negativos, los índices de validez y de Youden y la confiabilidad diagnóstica de ambas pruebas fueron satisfactorios. Conclusiones: Los sistemas evaluados exhibieron un desempeño comparable con la histología y la prueba rápida de ureasa para la detección activa de la infección por H. pylori, lo que demuestra su utilidad para el diagnóstico y el manejo oportuno del paciente, sin la necesidad de emplear pruebas invasivas(AU)

Introduction: stool antigen tests have been considered to be promising for the diagnosis of Helicobacter pylori infection. For their incorporation into medical practice, it is indispensable to demonstrate their accuracy in a study population. Objective: evaluate the diagnostic capacity of the commercial systems ELISA SD and SD BIOLINE, Standards Diagnostics, Korea, in Cuban patients with gastroduodenal symptoms. Methods: an evaluation was conducted of 101 stool samples from patients previously classified as H. pylori positive and negative by reference histological tests and the rapid urease test. Estimation was made of performance parameters for both diagnostic systems using the software EPIDAT 3.1. Results: Sensitivity for the systems ELISA SD and SD BIOLINE was 85.25 percent and 75.41 percent, respectively. Specificity for both was 92.50 percent. Positive and negative predictive values, validity and Youden's indices, and diagnostic reliability were satisfactory for both tests. Conclusions: the systems evaluated were found to have a performance level comparable with histological tests and the rapid urease test for active detection of H. pylori infection. This confirms their usefulness for the diagnosis and timely management of patients without having to use invasive tests(AU)

Evaluación de reactivos cubanos elaborados para el diagnóstico rápido de Haemophilus influenzae tipo B / Evaluation of Cuba-made reagents for the rapid diagnosis of Haemophilus influenzae type B Formato PDF

Se probaron en la detección del antígeno capsular específico de haemophilus influenzae tipo b (Hib), un reactivo de látex y un antisuero para contrainmunoelectroforesis (CIE) e hinchazón capsular (HC), producidos en el Laboratorio de Infecciones Respiratorias Agudas Bacterianas del Instituto ®Pedro Kourí¼. Se evaluaron los reactivos en el serotipaje de 786 cepas de Haemophilus influenzae aisladas de procesos invasivos y de portadores nasofaríngeos, y en el diagnóstico rápido a partir de muestras de líquido cefalorraquídeo, suero y orina de 258 pacientes con diagnóstico clínico de meningoencefalitis. Se obtuvieron satisfactorios índices de sensibilidad y especificidad, los que fueron determinados utilizando como referencia el antisuero para Hib comercializado por la DIFCO para la técnica de HC y CIE, y el reactivo de látex Wellcogen para el diagnóstico de Hib. Se propone la validación de ambos reactivos por parte de los organismos nacionales acreditados, para que estos puedan ser introducidos en la red cubana de salud pública

Novedoso esquema de inmunización para la obtención de anticuerpos anti-LPS de Haemophilus influenzae tipo B / A novel immunization schedule for obtaining antibodies to Haemophilus influenzae type B LPS

Se ensayó un novedoso esquema de inmunización dirigido a la elevación de anticuerpos para Haemophilus influenzae tipo b, en el que se combinaron como inmunógenos un antígeno celular inactivado con formaldehído 0,5 porciento, y un antígeno lipopolisacarídico parcialmente purificado mediante un método de precipitación selectiva con solventes orgánicos. Se obtuvieron anticuerpos de elevada especificidad y actividad biológica con títulos de hasta 1:256 por contrainmunoelectroforesis, que fueron purificados mediante precipitación selectiva con sulfato de amonio y cromatografía de intercambio iónico con la utilización de una columna de DEAE-Sepharose. La metodología propuesta en este trabajo permite la producción de anticuerpos purificados, útiles en la optimización de técnicas de diagnóstico serológicas y de serotipaje de cepas de H. influenzae b